Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (recombinant).  Store at –20℃
#3020 1,000 U	1vial of 1,000 U/vial : 30 U/µl. Supplied with 2x0.5 ml of 5X rTDT Rxn Buffer with CoCl2
#3020L 5,000U	5 vials of #3020 : 30 U/µl. Supplied with 10x0.5ml of  5X rTDT Rxn Buffer with CoCl2

 

Description

Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, Recombinant, catalyzes the repetitive addition of mononucleotides to the terminal 3´-OH of a DNA initiator accompanied by the release of inorganic phosphate. Single-stranded DNA is preferred as an initiator. Polymerization is not template-dependent. The addition of 1mM Co²⁺ (as CoCl₂) in the reaction buffer allows the tailing of 3´-ends with varying degrees of efficiency.

 

Features

-    Tails Any Type of 3´ End: The presence of 1mM CoCl₂ in the reaction buffer allows the tailing of any type of 3´ end (3´ and 5´ overhangs or blunt ends)

-   Useful for Apoptotic DNA Labeling

-     Positive Control DNA: Positive Control Oligo(dT)₁₅ Primer, which can be used to monitor incorporation rates, is included

-    Provided with 5X Reaction Buffer: 500mM cacodylate buffer (pH 6.8 at 25°C), 5mM CoCl₂, 0.5mM DTT

 

Applications

-    Tailing reactions to add complementary homopolymer tails to DNA vectors and cDNA

-    3´ end-labeling of modified nucleotides (e.g. fluorescein-, biotin-, aminoallyl-labeled nucleotides)

-    TUNEL assays

 

Source

Recombinant E. coli strain with a cloned gene encoding calf thymus terminal deoxynucleotidyl transferase

 

Concentration and Storage Conditions

Concentration,  30 U/µl

Store at –20°C.

 

Storage Buffer

50mM potassium phosphate (pH 6.4), 100mM NaCl, 1mM β-mercaptoethanol, 0.1% Tween^® 20 and 50% glycerol.

 

Reaction Buffer (x5)

500mM Cacodylate buffer (pH6.8), 5mM CoCl₂ and 0.5mM DTT

 

Unit Definition

One unit of activity catalyzes the transfer of 0.5 picomoles of ddATP to oligo(dT)₁₆ per minute at 37°C in 1X Terminal Transferase Buffer. The resulting oligo(dT)₁₇ is measured by HPLC.

 

Quality Control Tests

Activity, endonuclease, DNase, RNase, 3´ end-labeling, apoptotic DNA end-labeling.

 

Protocol : [alpha-³²P]dNTP to the 3´ Termini of Single-Stranded DNA Primers

1. Set up the reaction mixture :

Terminal Transferase 5X Buffer                           4.0µl

primer                                                                  2pmol

[α-³²P]dATP (800Ci/mmol, 10mCi/ml)                   1.6µl

rec. Terminal Deoxynucleotidyl Transferase      10–20 units

water to a final volume of                                    20µl

 

2. Incubate at 37°C for 60 minutes.

3. Stop the reaction by heating at 70°C for 10 minutes.

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